| Utilizando a técnica de DNA shuffling acoplada a Phage display, nosso grupo de pesquisa obteve uma biblioteca de sequências recombinantes do gene cry8Ka1 de B. thuringiensis S811 e selecionou as variantes que apresentaram atividade melhorada contra Anthomonus grandis (bicudo-do-algodoeiro). Dentre essas, a proteína recombinante Cry8Ka5 apresentou a mais alta atividade específica contra o bicudo e está sendo usada para desenvolver plantas transgênicas de algodão resistentes a esse inseto-praga. Atualmente, grande atenção tem sido dada à avaliação de segurança de proteínas recombinantes. Neste contexto, a avaliação do potencial citotóxico sobre células-modelo de organismos não-alvo e contra bioindicadores de toxicidade como microcrustáceos pode ser importante para predizer sobre a segurança dessas proteínas. Este trabalho objetivou obter informações sobre a segurança de Cry8Ka5 através dos ensaios de atividade hemolítica contra eritrócitos de mamíferos e toxicidade contra náuplios de Artemia sp. A presença de atividade hemolítica em suspensão de eritrócitos de humanos (tipo A, B, AB e O), coelho e rato a 1% foi avaliada após incubação por 1h, a 37 °C, sendo a hemólise verificada a 540 nm. Os efeitos da entomotoxina sobre a sobrevivência de náuplios de Artemia sp. foram avaliados por 24h, a 25 °C. Em ambos os ensaios foram utilizadas concentrações da entomotoxina variando de 10-1000 µg/mL. Cry8Ka5 não foi capaz de promover hemólise significativa (>50%) dos eritrócitos das diferentes espécies de mamíferos, mesmo na concentração mais alta. Para mortalidade de 50% dos naúplios foi necessário uma alta concentração de proteína (LC50 755.1 ± 86,9 µg/mL). Desta forma, a entomotoxina Cry8Ka5 apresentou um baixo potencial tóxico para os dois modelos testados. No entanto, estudos in silico e in vivo estão sendo realizados por nosso grupo de pesquisa para garantir a segurança de Cry8Ka5 para expressão em algodão. |